Ym maes diagnosteg moleciwlaidd, mae adwaith cadwyn polymeras (PCR) wedi cael ei ystyried ers tro fel y safon aur ar gyfer canfod asid niwclëig. Yn y blynyddoedd diwethaf, mae technolegau mwyhau isothermol, a gynrychiolir gan ymhelaethu polymeras ailgyfuno (RPA), wedi cael sylw cynyddol oherwydd eu cyflymder, eu symlrwydd a'u haddasrwydd ar gyfer profion ar-safle.
Er bod PCR ac RPA yn ddulliau mwyhau asid niwclëig, maent yn wahanol iawn o ran egwyddorion gweithio, gofynion offer, a senarios cymhwyso, gan wneud pob technoleg yn addas ar gyfer gwahanol anghenion diagnostig.
1. Egwyddorion Craidd: Beicio Thermol yn erbyn Cyson-Ymhelaethu ar y Tymheredd
Mae PCR yn broses biocemegol sy'n gallu chwyddo un moleciwl DNA yn filiynau o gopïau o fewn cyfnod byr o amser. Mae'r adwaith yn dibynnu ar feicio thermol dro ar ôl tro ac mae'n cynnwys tri phrif gam:
1.Dadnatureiddio (90–95 gradd ) – DNA dwbl-yn cael ei wahanu'n llinynnau sengl.
2. Anelio (55-65 gradd ) - Mae preimwyr yn rhwymo i'r dilyniannau targed.
3. Estyniad (72 gradd ) – DNA polymeras syntheseiddio llinynnau DNA newydd.
Trwy'r cylchoedd hyn a reolir gan dymheredd, mae DNA targed yn cael ei chwyddo'n esbonyddol gyda manwl gywirdeb uchel. Fodd bynnag, mae angen offer beicio thermol cymhleth ar PCR ac fel arfer mae'n cymryd 1-2 awr i'w gwblhau.
Mewn cyferbyniad, mae RPA yn gweithredu ar dymheredd cyson o 37-42 gradd, gan alluogi mwyhau asid niwclëig cyflym heb gylchrediad thermol. Mae'r dechnoleg yn dibynnu ar weithred gydgysylltiedig proteinau ailgyfuno, proteinau rhwymo DNA sengl, a llinyn-dadleoli DNA polymeras i gyflawni mwyhad targed penodol iawn o dan amodau isothermol.
Mae gan y DNA polymeras a ddefnyddir yn RPA weithgaredd dadleoli ceinciau ond nid oes ganddo weithgaredd ec-niwcleas 5'→3'. Yn ystod ymhelaethu, mae paent preimio allanol yn ymestyn ar hyd y llinyn templed. Pan fyddant yn dod ar draws-rhanbarthau sownd dwbl wedi'u syntheseiddio o baent preimio mewnol, ni all y polymeras ddiraddio'r llinyn i lawr yr afon ac yn hytrach mae'n ei ddadleoli, gan gynhyrchu cynhyrchion mwyhau newydd.
Mae'r adwaith cyfan yn cael ei gwblhau o dan dymheredd cyson, gan ddileu'r angen am offeryniaeth gymhleth a galluogi gwir bwynt o brofion seiliedig ar ofal a maes. Trwy ymgorffori trawsgrifiad gwrthdro, gellir cymhwyso RPA hefyd i ganfod targedau RNA.
Gellir dadansoddi canlyniadau ymhelaethu gan ddefnyddio fformatau darllen allan lluosog, gan gynnwys canfod diweddbwynt,-monitro fflworoleuedd amser real, profion llif ochrol, a gellir eu hintegreiddio ymhellach â systemau Cas CRISPR, microhylifau, neu ddilyniannu cenhedlaeth nesaf (NGS) ar gyfer datblygu assay uwch.
Senarios Cymhwysiad: Precision Laboratory vs. On-Profi Cyflym Safle
Mae PCR wedi dod yn un o'r technolegau diagnostig moleciwlaidd mwyaf gwerthfawr ac mae'n parhau i fod y safon aur ar gyfer profi asid niwclëig.
Diolch i'w gywirdeb uchel, cost-effeithiolrwydd, a'r gallu i dyfu, mae PCR yn cael ei ddefnyddio'n eang mewn diagnosteg glinigol, labordai canolog, sefydliadau ymchwil, a rhaglenni sgrinio ar raddfa fawr, lle mae seilwaith a phersonél hyfforddedig ar gael yn rhwydd.
Mae RPA, ar y llaw arall, yn cynnig manteision clir mewn diagnosteg cyflym, ar-safle. Gydag ymhelaethiad wedi'i gwblhau mewn cyn lleied ag 20 munud, gofynion offer lleiaf, a gweithrediad syml, mae RPA yn ddelfrydol ar gyfer.
- Gofal iechyd sylfaenol a lleoliadau brys
- Tollau a ffiniau archwilio
- Sgrinio maes o glefydau anifeiliaid a phlanhigion
- Profion amgylcheddol a diogelwch bwyd
O'i gyfuno â dyfeisiau cludadwy a stribedi llif ochrol, mae RPA yn galluogi profion moleciwlaidd cyflym a dibynadwy y tu allan i labordai traddodiadol.
MIRA (Ymhelaethu Cyflym Aml-ensym Isothermol)yw technoleg chwyddo isothermol perchnogol Amp Future. Mae'n perthyn i'r un teulu technegol ag RPA ac mae wedi'i ysbrydoli gan fecanweithiau ailgyfuno a thrwsio DNA naturiol, gan ddefnyddio ensymau swyddogaethol lluosog i gyflawni mwyhad asid niwclëig cyflym o dan dymheredd cyson.
Mae MIRA yn defnyddio system gydlynol o bum ensym allweddol, gan gynnwys helicase, recombinase, protein rhwymo DNA sengl, a DNA polymeras, i alluogi:
- Amrediad tymheredd gweithredu eang: 25 gradd -45 gradd
- Ymhelaethiad cyflym: canlyniadau o fewn 20 munud
- Sensitifrwydd a phenodoldeb uchel
- Gwell diogelwch a llai o risg o halogiad
Mae MIRA yn dechnoleg mwyhau asid niwclëig sydd wedi'i dylunio'n benodol ar gyfer -safle a phwynt-profion gofal.
Gan adeiladu ar lwyfan MIRA, mae Amp Future wedi datblygu portffolio cynhwysfawr o gynhyrchion ar gyfer POCT moleciwlaidd cyflym, gan gynnwys:
Asiant Rhyddhau Asid Niwcleig Cyflym:
Ceir asid niwclëig chwyddadwy o fewn 5 munud ar dymheredd ystafell; ataliad isel, gan ganiatáu ar gyfer llwytho sampl llawn o hyd at 50 μL; cludo a storio tymheredd ystafell, nid oes angen amddiffyniad ysgafn.
Adweithydd Ymhelaethu Asid Niwcleig Isothermol:
Ymhelaethiad wedi'i gwblhau mewn 5-20 munud, yn gyflym ac yn effeithlon; gwahanol ffurfiau adweithydd (powdr lyophilized, microspheres lyophilized, ac ati); dulliau cyflwyno canlyniadau amrywiol (electrofforesis, fflworoleuedd, stribedi prawf).
Dyfeisiau Symudol Bach:
Synwyryddion isothermol digidol, offer profi maint poced, sy'n hawdd eu dal mewn un llaw, wedi'u cyfarparu â banc pŵer, sy'n eich rhyddhau rhag cyfyngiadau'r labordy ac yn dod â phrofion asid niwclëig cywir i'r maes.
Stribedi Prawf Sengl / Lluosog:
Wedi'i optimeiddio yn seiliedig ar fethodoleg MIRA ar gyfer gwell cydnawsedd; ynghyd â thechnoleg MIRA, gan amlygu cyfleustra.
Dadansoddwr Ymhelaethu Asid Niwcleig Llawn Awtomataidd:
Dim ond un gweithrediad llwytho sampl sydd ei angen ar gyfer canfod cwbl awtomataidd; terfyn canfod i lawr i gopi sengl; mae chwyddo isothermol a chapio awtomatig yn lleihau'r risg o halogiad.
Ar{0}}becyn Profi Cyflym Safle:
Ar{0}}y-profion ar hap, unrhyw bryd, unrhyw le, i gyd mewn un pecyn; yn cwblhau profion mewn 30 munud, yn gywir ac yn sensitif.
Am fwy o wybodaeth am gynnyrch neu atebion, mae croeso i chi gysylltu â ni.