Yma, sefydlu sCRAM (motiff protospacer cyfagos is-optimaidd (PAM)-cyfryngu CRISPR RNA a Cas12a niwcleas wedi'i gyfuno â mwyhad cyflym aml-ensymaidd isothermol), llwyfan diagnostig cyflym ac echdynnu-sy'n canfod ASFV o fewn 20 munud. Mae sCRAM yn integreiddio cam rhyddhau asid niwclëig cyflym (40 gradd , 5 munud) ag un adwaith tiwb sy'n cyfuno mwyhad isothermol amlensymau (MIRA) a PAM is-optimaidd-wedi'i gyfryngu CRISPR/
System Cas12a (37 gradd , 15 munud), offeryn galluogi -darlleniad gweledol am ddim trwy olau UV neu stribedi llif ochrol (LFS). Mae sCRAM yn dangos sensitifrwydd canfod copi sengl ac nid yw'n arddangos unrhyw adweithedd croes gyda phum pathogen moch cyffredin (PRRSV, PPV, JEV, PCV, a PRV). Datgelodd gwerthusiad o 111 o samplau efelychiedig a chlinigol (gan gynnwys gwaed, plasma, a swabiau) gydgordiant 100% â qPCR ar gyfer darlleniad UV a 98.20% ar gyfer LFS
darlleniad, gyda'r ddau ddull yn arddangos 100 % penodolrwydd. Mae symlrwydd, cyflymder, ac addasrwydd maes sCRAM yn tanlinellu ei botensial ar gyfer gwyliadwriaeth ASFV ddatganoledig mewn-gosodiadau cyfyngedig adnoddau, gan gynnig offeryn pwerus ar gyfer cyfyngu achosion.
Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddatblygu sCRAM, llwyfan canfod ASFV cyflym a maes-sy'n integreiddio PAM is-optimaidd-CRISPR/Cas12a wedi'i gyfryngu gyda mwyhad isothermol amlensymau. Mae'r assay yn cyflawni un-copi 1 copi/uL sensitifrwydd o fewn 20 munud ac nid yw'n dangos unrhyw groes-adweithioldeb â phathogenau moch mawr. Roedd dilysu clinigol ar draws samplau gwaed, plasma a swab yn dangos cydymffurfiaeth lawn â qPCR gan ddefnyddio allddarlleniad golau UV a chywirdeb o 98.20% trwy stribedi llif ochrol. Gyda gweithrediad symlach, sensitifrwydd a phenodoldeb uchel, a dehongliad canlyniad gweledol, mae sCRAM yn cynnig potensial cryf ar gyfer gwyliadwriaeth ASFV ar-safle a phwynt ehangach-o-gymwysiadau diagnostig gofal.
