《Papur hybrid/dyfais microfluidig PDMS wedi'i integreiddio ag echdynnu RNA ac ymhelaethiad polymeras ailgyfuno ar gyfer canfod norofeirws yn Foods Express
Mae norofeirws (Hunov) yn perthyn i deulu Caliciviridae ac yn cael ei drosglwyddo'n bennaf trwy fwyd halogedig. Mae'n un o brif achosion gastroenteritis acíwt.
Mae Canolfan Clefydau Firaol Sefydliad Lady Davis ym Mhrifysgol McGill yng Nghanada wedi cyhoeddi ymchwil ar y cyd ar astudiaeth ganfod gysylltiedig. Datblygodd y tîm ymchwil ddyfais microfluidig wedi'i seilio ar origami a defnyddio murine norofirws 1 (MNV -1) ar gyfer cyfres o arbrofion profi. Mae'r ddyfais yn amsugno RNA gan ddefnyddio stribed papur, yn chwyddo'r RNA gan ddefnyddio technoleg ymhelaethu asid niwclëig cyflym aml-ensym MIRA, ac yn perfformio dadansoddiad llif ochrol ar y stribed papur. Delweddir y broses ganfod a'r canlyniadau cyfan, gyda'r prawf wedi'i gwblhau o fewn 35 munud, gan gyflawni penodoldeb 100% a therfyn canfod o 200 pFU/mL. Mae'r ddyfais hon yn dangos potensial sylweddol ar gyfer canfod firysau a gludir gan fwyd mewn cynhyrchion amaethyddol, yn enwedig mewn amgylcheddau o bell ac cyfyngedig o ran adnoddau.
Dull arbrofol
Mae stribedi papur cellwlos yn amsugno rna mnv -1, a ryddhawyd wedyn i ymweithredydd Mira. Cafodd yr RNA ei wrth-drawsgrifio gyntaf i DNA cyflenwol (cDNA) ac yna ei chwyddo i mewn i DNA â haen ddwbl (DSDNA). Yn dilyn hynny, mae stilwyr wedi'u rhwymo'n benodol i'r dilyniant targed. Ar ôl i'r gweddillion tetrahydrofuran (THF) gael ei glirio gan endonuclease IV, estynnwyd y llinyn sy'n weddill gan polymeras i gynhyrchu amplicon cyflawn. Cafodd yr amplicon ei ddal a'i ddelweddu fel newid lliw ar y llinell-T.
(Diagram sgematig o egwyddor arbrofol)
Cyflawniadau datblygu
(Diagram sgematig o ddyfais microfluidig papur/pdms)
Datblygodd y tîm ymchwil ddyfais microfluidig papur/PDMS plygadwy sy'n integreiddio sawl swyddogaeth, gan gynnwys echdynnu asid niwclëig, ymhelaethiad asid niwclëig isothermol, a chanfod gweledol. Mae'r ddyfais hon yn integreiddio'r broses gyfan yn ddi -dor, o baratoi sampl i ganfod pwynt terfyn MNV -1.
Mae'r ddyfais microfluidig yn cwblhau'r canfod o fewn 35 munud, gyda therfyn canfod o 200 pFU/mL. Cyfrifir bod cost pob dyfais microfluidig yn $ 6.76, gan ei gwneud y dull mwyaf cost-effeithiol ymhlith yr holl ddulliau canfod hysbys a ddefnyddir gan y tîm ymchwil.
Arwyddocâd arbrofol
Gwerthusodd y tîm ymchwil berfformiad y ddyfais microfluidig hon ymhellach ar gyfer canfod MNV -1 mewn letys a mafon. Fe wnaethant gyflwyno darnau RNA MNV -1 crai i samplau amaethyddol ffres, gan ddileu'r angen am gamau echdynnu a phuro RNA firws cymhleth. Canfu’r ddyfais 170 pFU/g mewn letys a 230 pFU/g mewn mafon.
(Sensitifrwydd MNV -1 Canfod mewn letys a mafon gan ddefnyddio'r ddyfais microfluidig)
Mae angen firysau purdeb uchel ar ddulliau moleciwlaidd traddodiadol ar gyfer canfod firysau mewn bwyd, fel PCR a QPCR, sy'n gwneud y broses o echdynnu firws, canolbwyntio a phuro o fatricsau bwyd yn gymhleth. Yn ogystal, mae dulliau traddodiadol yn gofyn am offer cymhleth, swmpus a drud, gan eu gwneud yn anaddas i'w defnyddio mewn amgylcheddau cyfyngedig o ran adnoddau.
Mae gan y ddyfais hon werth sylweddol ar gyfer canfod Hunov a firysau eraill a gludir gan fwyd yn gyflym yn y gadwyn gyflenwi bwyd.
Gwybodaeth Erthygl
Cyfnodolyn: Microbioleg Gymhwysol ac Amgylcheddol
Teitl yr erthygl: Papur Hybrid/Dyfais Microfluidig PDMS wedi'i integreiddio ag echdynnu RNA ac ymhelaethiad polymeras ailgyfuno ar gyfer canfod norofeirws mewn bwydydd
Ffactor Effaith: 3.9
Tîm Ymchwil: Canolfan Clefydau Firaol, Sefydliad Arglwyddes Davis, Prifysgol McGill