Mae Staphylococcus haemolyticus yn facteriwm coagulase-negyddol gram-positif sy'n gyffredin iawn mewn ysbytai. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae heintiau a gafwyd yn yr ysbyty wedi cael sylw cynyddol oherwydd eu risg uwch. Gall Staphylococcus haemolyticus achosi heintiau croen ymhellach, llid yr ymennydd, peritonitis, a hyd yn oed sepsis. Gall oedi mewn diagnosis clinigol arwain at waethygu statws iechyd, felly mae diagnosis cyflym o S. haemolyticus yn allweddol i union driniaeth.
Cyhoeddodd tîm ymchwil yr athro Ji Tuo o Adran Labordy Canolog Ysbyty Ail Bobl Lianyungang, China erthygl "A Stapid and Visual Cantion of Staphylococcus haemolyticus mewn sbesimenau clinigol gyda mira-lfs" yn y cyfnodolyn "Analytica Chimica Acta", gyda Ffactor Effaith 6.2.
Trosolwg 1.Research
Yn yr astudiaeth hon, sefydlwyd dull MIRA-LFS yn seiliedig ar y genyn MVAA i ganfod Staphylococcus haemolyticus. Cyfunwyd y dechnoleg ymhelaethu asid niwclëig cyflym aml-ensym MIRA â stribed prawf llif ochrol LFS i sicrhau canfod pathogen cyflym.
Cynhaliwyd yr arbrawf ar 37 gradd, a gellid canfod y canlyniadau o fewn 9 munud. Y sensitifrwydd canfod oedd 0. 147cfu/adwaith.
Mae dull canfod MIRA-LFS yn addas ar gyfer canfod pwynt sefydlog Staphylococcus hemolyticus mewn samplau clinigol, gan wireddu'r dull POCT ar gyfer nodi hemolytigus Staphylococcus, sydd o werth mawr ar gyfer diagnosis clefyd cyflym a thriniaeth mewn ardaloedd mewn ardaloedd sydd â gwasanaethau meddygol sydd heb eu tanseilio.
Defnyddiodd y tîm ymchwil MIRA-LFS, qPCR a dulliau diwylliant bacteriol traddodiadol i ddadansoddi 95 o samplau clinigol ar hap a chadarnhau'r cymhwysedd clinigol.
Dulliau 2.Research
Dangosir y diagram sgematig o ganfod Mira-LFS uchod.
Defnyddiodd yr ymchwil becyn ymhelaethu cyflym isothermol DNA Biotechnoleg Amp-Future (math o stribed prawf aur colloidal) a stribedi prawf canfod asid niwclëig.
Hyd primer genyn mvaa yw 30-35 niwcleotidau, a hyd y cynnyrch ymhelaethu yw 100-350 bp. Dyluniwyd cyfanswm o 6 pâr o brimynnau ymgeisydd. Perfformiwyd dadansoddiad MIRA gan ddefnyddio GDNA o straenau safonol Staphylococcus hemolyticus, cafodd primers ymgeisydd eu sgrinio, ac arddangoswyd cynhyrchion ymhelaethu gan ddefnyddio electrofforesis gel agarose 2%.
Yna dyluniwch y stiliwr yn seiliedig ar y dilyniant primer ymlaen (yn ymestyn 16 bp yn ôl). Cafodd diwedd 5 'y stiliwr ei labelu â FITC a labelwyd y pen 3' gyda blocio C3. Defnyddiwch THF i ddisodli'r 31 niwcleotid yn y stiliwr. Mae THF 30 bp o'r pen 5 'a 15 bp o'r pen 3'. Mae pen 5 'y primer gwrthdroi a ddewiswyd wedi'i labelu â biotin.
Ar ben hynny, optimeiddiodd y tîm ymchwil yr amodau adweithio ar gyfer canfod Mira-LFS o Staphylococcus hemolyticus. Prawf ar 37 gradd ar gyfnodau o 2 funud o 4 i 12 munud. Mae'r canlyniadau'n cael eu harddangos ar amser ymateb 8 munud ac mae'r llinell brawf i'w gweld yn glir. Yn ogystal, cynhelir profion ar gyfnodau o 5 gradd o radd 22-52. Gradd 37-42 yw'r tymheredd mwyaf addas ar gyfer canfod Mira-LFS. Felly, amser ymateb gorau posibl a thymheredd y dull Mira-LLF ar gyfer Staphylococcus haemolyticus yw 8 munud a 37 gradd, yn y drefn honno. Ynghyd â'r canlyniad terfynol yn cael ei ddelweddu gan LFS o fewn 1 munud, cyfanswm yr amser canfod yw 9 munud.
Canlyniadau 3.Experimental
Gwirio sensitifrwydd
Perfformiwyd assay Mira-LFS ar wahanol grynodiadau o DNA genomig (GDNA) a gafwyd o ddiwylliannau Staphylococcus haemolyticus wedi'i wanhau'n gyfresol (1 {0^6-10}^0 cFU/ml).
Dangosodd dadansoddiad atchweliad uned tebygol mai'r LOD 95% a bennwyd gan yr assay Mira-LLF oedd 0. 147 CFU/adwaith.
Gwirio penodoldeb
Trwy ddadansoddi 18 o straenau microbaidd pathogenig cyffredin a 15 straen clinigol Staphylococcus haemolyticus, penderfynwyd ar ddetholusrwydd canfod mira-lfs Staphylococcus haemolyticus. Dangosodd y canlyniadau fod y prawf MIRA-LFS yn negyddol ar gyfer 18 o facteria pathogenig arall ac yn bositif ar gyfer 15 sampl glinigol wedi'u gwirio o Staphylococcus haemolyticus.
Mae canfod MIRA-LFS yn hynod ddetholus ac yn addas ar gyfer sgrinio Staphylococcus hemolyticus.
Profi sampl gwirioneddol
Casglodd Ysbyty Ail Bobl Lianyungang 95 sbesimen ar hap, gan gynnwys 35 o samplau meinwe croen a meddal, 16 sampl wrin, 14 sampl crachboer a 30 sampl gwaed.
Dangosodd y canlyniadau fod y dull canfod 100% yn gyson â'r dull qPCR. Yn ogystal, o'i gymharu â'r safon aur (GB/T4789. 11-2003), sensitifrwydd a phenodoldeb y dull canfod mira-LLF ar gyfer nodi haint hemolyticus staphylococcus oedd 100% a 98.73%, yn y drefn honno. Fe wnaeth y canlyniadau hyn wirio ymarferoldeb technegol y dull hwn ymhellach wrth ganfod Staphylococcus hemolyticus mewn samplau clinigol.
Defnyddir y dull MIRA-LFS ar gyfer canfod POCT yn gyflym o Staphylococcus hemolyticus. Mae'n effeithlon, yn gywir, yn syml ac yn gost isel, ac yn helpu i wneud diagnosis cyflym a phenderfyniadau triniaeth.
Dysgu am Dechnoleg Mira
Mae technoleg ymhelaethu asid niwclëig cyflym aml-ensym amp-dyfodol yn ymhelaethu asidau niwcleig ar dymheredd cyson o radd 39 gradd -42, gydag amser ymateb o ddim ond 5-20 munud. Yn ogystal, nid oes angen amodau labordy caeth, ac mae'r senarios cais yn cael eu arallgyfeirio: adrannau labordy ysbytai cyffredinol, gofal sylfaenol, profi cartref, meysydd, ac ati.
Mae ffurflenni cynnyrch ymweithredydd yn amrywiol: powdr wedi'i rewi-sychu, microspheres wedi'u sychu'n rhewi, ac ati; Mae canlyniadau arddangos yn amrywiol: electrofforesis gel, cromlin fflwroleuedd, stribedi prawf aur colloidal, ac ati. Mae gan yr ymweithredydd berfformiad sefydlog, mae'n hawdd ei weithredu, ac mae'n gyfleus i'w storio a'u cludo.
Gyda MIRA fel y dechnoleg platfform craidd, mae wedi datblygu cyfres o gynhyrchion ategol fel "technoleg rhyddhau asid niwclëig cyflym iawn", "synhwyrydd fflwroleuedd isothermol sianel ddeuol", "system canfod caeedig cwbl awtomatig integredig", "dyfais canfod asid niwclëig hunan-brofi", creu toddiant cyffredinol ar gyfer toddiant cyflym.