Mae heintiau anadlol acíwt yn salwch anadlol cyffredin mewn plant, a achosir yn aml gan firysau. Mae firws syncytial anadlol (RSV) ac adenofirws anadlol (ADV) yn ddau bathogen cyffredin sy'n achosi heintiau anadlol acíwt mewn plant. Gall achosion ysgafn achosi symptomau oer cyffredin fel peswch a thrwyn yn rhedeg, tra gall achosion difrifol achosi cymhlethdodau difrifol fel niwmonia ac otitis cyfryngau. Yn ôl argymhellion Sefydliad Iechyd y Byd, mae angen i ganfod pathogenau fod yn gyflym, yn gywir, yn sensitif ac yn benodol ac ni ddylent ddibynnu ar dechnegwyr arbenigol nac offerynnau mawr. Felly, mae'n arbennig o bwysig datblygu dull canfod ar gyfer RSV ac ADV a all fodloni'r gofynion canfod uchod.
Cyhoeddodd y Grŵp Ymchwil y Cyfarwyddwr Ma Dongli o Sefydliad Pediatreg Ysbyty Plant Shenzhen erthygl "assay ymhelaethu polymeras amlblecs ailgyfuno wedi'i gyfuno â CRISPR/ CAS12A ar gyfer canfod firws syncytial anadlol ac adenofiriad anadlol "6 yn y cyfnodolyn" yn y Cyfnodolyn "yn y Cyfnodolyn" yn y Cyfnodolyn "yn y Cyfnodolyn" yn y Cyfnodolyn "yn y Cyfnodolyn" yn y Cyfnodolyn "yn y Cyfnodolyn" yn y Cyfnodolyn "yn y Cyfnodolyn" yn y Cyfnodolyn "yn y Cyfnodolyn"
Trosolwg Ymchwil
Mae'r technoleg ymhelaethu asid niwclëig cyflym aml-ensym yn cael ei gyfuno â'r system canfod CRISPR/CAS. Trwy ddylunio mira primers a rNAs CRISPR (CRRNAS), perfformio cymariaethau dilyniant lluosog, optimeiddio amodau ymateb, a defnyddio dyfeisiau canfod rhifiadol fflwroleuedd i wirio sensitifrwydd a phenodoldeb.
A defnyddio'r canlyniadau qPCR fel rheolaeth gymhariaeth, astudiwyd cysondeb canlyniadau profion 160 o samplau swab gwddf clinigol.
Canlyniadau arbrofol
1. Sensitifrwydd a phenodoldeb dull canfod Mira-CRISPR/CAS12A
Yn y canfod dull MIRA, defnyddir y pâr primer RSV-F1/R1 i ymhelaethu ar asidau niwclëig o samplau swab gwddf o RSV, ADV, PIV, PIV, RHV, AS, CP, Flub, HMPV, Flua, neu RSV/RSV/RSV/RSV/CLEIFION CYFLWYNO. Ac eithrio RSV ac ADV, a oedd â bandiau chwyddedig, roedd y canlyniadau eraill yn negyddol, gan nodi nad oedd y primers Mira a ddewiswyd yn croes-ymateb gyda'r wyth pathogen arall wedi'u profi a'u bod wedi'u cadw'n dda.
Yn dilyn hynny, gwanhawyd y plasmidau ailgyfunol RSV ac Adv 10times gan ddefnyddio dŵr di -haint, ac roedd y terfynau canfod ar gyfer RSV ac ADV yn 106copïau/ml.
(1-10: Samplau swab gwddf gan gleifion â RSV, cyd-heintio RSV/ADV, a samplau pathogen anadlol eraill yn y drefn honno)
2. Cymharwch â qPCR
O'i gymharu â'r dull qPCR, mae terfynau canfod RSV ac ADV yn 103 copi/ml
(Sensitifrwydd canfod qPCR o RSV ac ADV)
Mae'r dull Mira-CRISPR yn fwy addas ar gyfer labordai llawr gwlad, gydag amser canfod byr, gweithrediad syml, ac nid oes angen offerynnau qPCR ar raddfa fawr i gwblhau gweithrediadau arbrofol.
3. Cymharu samplau clinigol
Casglwyd samplau swab gwddf gan 160 o blant â heintiau anadlol acíwt. Ar yr un pryd, defnyddiwyd dull Mira-CRISPR a dull qPCR i'w canfod, a chymharwyd y canlyniadau â chanlyniadau treialon clinigol.
O'i gymharu â'r dull qPCR, sensitifrwydd y dull mira-crispr ar gyfer RSV ac ADV oedd 98.1% a 91.4% yn y drefn honno, a'r penodoldeb canfod oedd 1 0 0%. Mae gwerth Kappa yn fwy na 0.95, gan nodi lefel uchel o gysondeb.
Mae gan y dull MIRA-CRISPR fanteision canfod RSV ac ADV yn gyflym, yn sensitif ac yn benodol. Gall ganfod heintiau firaol yn brydlon ac yn gywir, ac mae'n fwy addas i'w defnyddio mewn ardaloedd ag adnoddau meddygol prin.